آر اکاوری

1. لوله یخ زده را از نیتروژن مایع خارج کرده و بلافاصله در حمام آب 37 درجه سانتیگراد، کمی تکان دهید. پس از ذوب شدن مایع (حدود 1-1.5 دقیقه) مقداری الکل بردارید و روی میز کار فوق تمیز قرار دهید.

2. سوسپانسیون سلولی را داخل یک لوله سانتریفیوژ 15 میلی لیتری با محیط 10 میلی لیتری ببرید (لوله یخ زده را با محیط بشویید و تمام سلول های چسبیده به دیواره را بشویید) و به مدت 5 دقیقه در 1000 سانتریفیوژ کنید.

3. مایع رویی معکوس شد و 1 میلی لیتر از محیط برای تعلیق سلول ها اضافه شد. در یک ظرف 10 سانتی‌متری با 10 میلی‌لیتر متوسط ​​دود کنید و به آرامی چپ و راست تکان دهید تا سلول‌ها به طور یکنواخت در ظرف پخش شوند.

4. نوع سلول و تاریخ، نام انسان و ... را علامت بزنید، آن را در دستگاه جوجه کشی CO2 قرار دهید، سلول ها را بچسبانید و محیط را تغییر دهید.

5. مدیوم هر 3 روز یکبار عوض می شد.

پ آسیج

1. گیاهان برای رسیدن به پوشش 80-90 درصد پاساژ شدند.

2. Abup رسانه اصلی .

3. تریپسین مناسب را اضافه کنید (فقط سلول ها را بپوشانید) و 1-2 دقیقه هضم کنید .

4. هضم با افزودن حجم مساوی از محیط حاوی سرم خاتمه یافت .

5. سلول ها را با پیپت باد کنید و همه آنها را معلق بگذارید.

6. سلول ها در یک لوله سانتریفیوژ 15 میلی لیتری آسپیره شدند و به مدت 5 دقیقه در 1000 سانتریفیوژ شدند.

7. مایع رویی را بریزید و 1-2 میلی لیتر محیط به آن اضافه کنید تا تمام سلول ها منفجر شوند.

8. سلول ها بسته به گونه های سلولی به چندین ظرف کشت منتقل شدند. به طور کلی سلول های سرطانی به 5 سلول تقسیم می شوند و سه سلول طبیعی منتقل می شوند. به کشت ادامه دهید.

آزاد برای هضم سلول ها و سانتریفیوژ آنها (همان بالا).

سلول ها را با محلول ذخیره سازی منجمد منجمد معلق کنید، آنها را در یک لوله فریزر استریل شده تقسیم کنید، چند دقیقه استراحت کنید و نوع سلول و تاریخ نگهداری یخ زده را مشخص کنید. سپس در پرفیوژن نیتروژن مایع ذخیره می شود.

تهیه محلول انجماد: 70% متوسط ​​20% FBS 10% DMSO. DMSO باید به آرامی اضافه شود و به طور پیوسته تکان داده شود.