به عنوان یک ماده کمکی در آزمایش های تشخیص ELISA، یک آنزیم بشقاب نقش تعیین کننده ای دارد و مستقیماً بر نتایج آزمایشی نهایی تأثیر می گذارد. کیفیت از صفحه آنزیمی عمدتاً به حساسیت آن به جذب پروتئین، تفاوت در ظرفیت جذب پروتئین بین صفحات و سوراخ ها و تفاوت بین دسته های خریداری شده بستگی دارد. صفحه آنزیمی . بنابراین، انتخاب یک صفحه آنزیمی محصولی با حساسیت جذب پروتئین بالا، تفاوت اندک بین سوراخ‌های ظرفیت جذب پروتئین و تفاوت کوچک بین دسته‌ها تضمینی برای آزمایشگر برای به دست آوردن نتایج آزمایشی قابل اعتماد و پایدار است.

صفحه آنزیمی طبقه بندی: با توجه به استانداردهای طبقه بندی مختلف، بشقاب دارد طبقه بندی های مختلف

1: با توجه به تعداد سوراخ ها می توان آن را به 96 سوراخ، 48 سوراخ و ... تقسیم کرد. صفحه آنزیمی عمدتاً با میکروپلیت خوان استفاده می شود بشقاب متر در بازار حداکثر 96 سوراخ است، بنابراین میکروپلیت 96 سوراخ است.

2: با توجه به ته های مختلف به ته صاف، ته U، پایین V و غیره تقسیم می شود.

ضریب شکست پایه تخت کم است که برای تشخیص در میکروپلیت مناسب است.

تی ضریب شکست میکروپلیت he U بالا است، برای نمونه‌برداری، نمونه‌برداری و اختلاط مناسب است و می‌تواند مستقیماً تغییر رنگ را بدون قرار دادن آن روی میکروپلیت مشاهده کند تا مشخص شود که آیا واکنش ایمنی مربوطه وجود دارد یا خیر.

میکروپلیت پایه V می تواند نمونه را با دقت جذب کند.

3: با توجه به توانایی های مختلف اتصال میکروپلیت و پروتئین و سایر مولکول ها، آن را به نیروی اتصال بالا، نیروی اتصال متوسط ​​و آمین تقسیم می کنند.

(1) نیروی اتصال بالا

پس از سطح این میکروپلیت، توانایی اتصال پروتئین آن به شدت افزایش می یابد، تا 300 ~ 400 نانوگرم IgG / cm2، و وزن مولکولی پروتئین متصل اصلی > 10 کیلو دالتون است. استفاده از این کلاس از میکروپلیت می تواند حساسیت را بهبود بخشد و غلظت و مقدار پروتئین پوشش داده شده را نسبتاً کاهش دهد که تولید واکنش های غیر اختصاصی آسان تر است. پس از پوشش با آنتی ژن یا آنتی بادی، شوینده غیر یونی نمی تواند به طور موثر محل پروتئین غیر متصل را ببندد و پروتئین باید به عنوان عامل درزگیر استفاده شود.

(2) نیروی اتصال متوسط

چنین صفحات میکروپلیتی به طور غیرفعال از طریق پیوندهای آبگریز روی سطح به پروتئین متصل می شوند و به عنوان حامل های فاز جامد برای پروتئین های ماکرومولکولی با وزن مولکولی> 20 کیلو دالتون، با ظرفیت اتصال پروتئین 200 تا 300 نانوگرم IgG / cm2 مناسب هستند. با توجه به ویژگی های تنها اتصال آن به ماکرومولکول ها، برای حامل های فاز جامد به عنوان آنتی بادی ها یا آنتی ژن های خالص نشده مناسب است تا پتانسیل واکنش متقابل غیر اختصاصی را کاهش دهد. صفحه می تواند یک پروتئین بی اثر یا یک شوینده غیریونی به عنوان محلول آب بندی باشد.

(3) آمیناسیون

این میکروپلیت پس از اصلاح سطح دارای یک گروه آمینه با بار مثبت است که پیوند آبگریز آن با پیوند آبدوست جایگزین می شود. این دسته از میکروپلیت به عنوان یک حامل فاز جامد برای پروتئین های مولکولی کوچک مناسب است. با استفاده از یک بافر و pH مناسب، سطح از طریق پیوندهای یونی به مولکول های کوچک با بار منفی متصل می شود. به دلیل خاصیت آبدوستی سطح آن و قابلیت اتصال کووالانسی توسط دیگر پیوندهای عرضی، می توان از آن برای تثبیت مولکول های پروتئین محلول در مواد ضدعفونی کننده مانند تریتون-100، توئین 20 و غیره استفاده کرد. عیب این صفحه به دلیل کاهش آب گریزی؛ علاوه بر این، سطح باید به طور موثر بسته شود. به دلیل خواص سطح آب دوست و کووالانسی، محلول آب بندی مورد استفاده باید قادر به تعامل با هر گروه عاملی در گروه آمینو غیر واکنشی و اتصال دهنده متقابل انتخابی باشد.

4. با توجه به رنگ می توان به شفاف، سیاه و سفید و سفید تقسیم کرد.

شفاف ترین مورد استفاده برای عمومی ترین آزمایش های ایمن سازی مرتبط با آنزیم است. در Relcontrast به میکروپلیت شفاف، میکروپلیت های مات نیز برای تشخیص نور، عموما سیاه و سفید وجود دارد. میکروپلیت سیاه خود دارای جذب نور است، بنابراین سیگنال آن بسیار کمتر از میکروپلیت سفید است، بنابراین به طور کلی برای تشخیص نور قوی مانند تشخیص فلورسانس استفاده می شود. میکروپلیت سفید برای تشخیص نور ضعیف استفاده می شود که اغلب برای نورتابی شیمیایی عمومی استفاده می شود. علاوه بر این، میکروپلیت سیاه می تواند مشکل واکنش های غیر اختصاصی را نیز تضعیف کند. در عین حال، توجه به این نکته مهم است که با میکروپلیت عمومی نمی توان نوری را تشخیص داد، زیرا نور ساطع شده از واکنش نورتابی شیمیایی همسانگرد است، اگر با یک میکروپلیت شفاف، نور نه تنها از جهت عمودی پخش شود. بلکه از جهت افقی، نور را به راحتی از طریق شکاف بین سوراخ و دیوار سوراخ ایجاد کنید، در نتیجه نور مقدار جذب نور سوراخ تحت تأثیر نور ساطع شده سوراخ مجاور قرار می گیرد.

یک میکروپلیت خوب باید دارای عملکرد جذب خوب، مقدار خالی کم، شفافیت بالای ته سوراخ و عملکرد مشابه بین صفحات و بین سوراخ‌های همان صفحه باشد. با توجه به تفاوت مواد اولیه و تفاوت در فرآیند تولید، کیفیت محصولات مختلف بسیار متفاوت است، بنابراین، عملکرد هر دسته از میکروپلیت قبل از استفاده باید از قبل بررسی شود. روش‌های بازرسی که معمولاً مورد استفاده قرار می‌گیرند عبارتند از غلظت معینی از IgG انسانی (معمولاً 10 نانوگرم در میلی‌لیتر) پوشیده شده با چاه‌های صفحه ELISA، پس از شستشو، افزودن رقت مناسب آنتی‌بادی ضد IgG با آنزیم به هر چاه، شستشو پس از حفظ حرارت، با افزودن رنگ سوبسترا، واکنش آنزیمی را متوقف کرده و جذب محلول را به ترتیب در هر چاه اندازه گیری کنید. شرایط واکنش کنترل شد به طوری که خواندن هر چاه در جذب حدود 0.8 نگه داشته شد. میانگین کل قرائت ها محاسبه شد. تفاوت بین میانگین همه قرائت های فردی و همه قرائت ها باید کمتر از 10٪ باشد. سه میکروپلیت زیر به عنوان مثال A، B و C هستند.

روش مستقیم: برای تشخیص جذب IgG انسانی روی سطح میکروپلیت

روش ساندویچ آنتی بادی دوگانه: آنتی ژن در سرم برای آنتی بادی ضد انسانی مثبت است

همانطور که از شکل بالا مشاهده می شود، در این سه نوع پلیت آنزیمی زیستی، میکروپلیت کلاس A اثر جذب پروتئین بهتری دارد، اما همچنین حساسیت جذب پروتئین را بهبود می بخشد که می تواند داده های تجربی قابل اعتمادتری را ارائه دهد. علاوه بر این، می توانید در مورد صفحه تفاوت دسته بپرسید. در زیر تفاوت دسته ای یک صفحه مشخص است. همانطور که از نمودار داده‌های اختلاف درون دسته‌ای مشاهده می‌شود، میکروپلیت از ثبات بین دسته‌ای خوبی برخوردار است و تفاوت ضریب تغییرات درون دسته‌ای (CV) حدود 5.0 درصد است که به طور قابل‌توجهی کمتر از ضریب تغییرات درون دسته‌ای است. زیر 10.0٪ در استاندارد کنترل کیفیت برای واکنش ایمنی بالینی. بنابراین برای آزمایشات الایزا نیز مناسب است.