مراحل دقیق سانتریفیوژ برای استخراج پروتئین های سیتوپلاسمی و هسته ای توسط سانتریفیوژ انجماد کم سرعت رومیزی

ارسال شده توسط مدیر | 23 Mar

سانتریفیوژ انجماد کم سرعت رومیزی در آزمایشگاه برای جداسازی اولیه و استخراج ماکرومولکول های بیولوژیکی، رسوبات و ... استفاده می شود. لوله گریز از مرکز از شیشه سخت، پلاستیک سخت پلی اتیلن و لوله فولادی ضد زنگ ساخته شده است. سانتریفیوژ مجهز به یک موتور محرک، یک تایمر، یک تنظیم کننده (نشانگر سرعت) و یک سیستم تبرید (محدوده دمای قابل تنظیم - 20 ~ 40 ℃) است، که می تواند سرهای چرخان را با ظرفیت های مختلف و انواع مختلف سرعت های چرخشی جایگزین کند. به نیازهای مواد گریز از مرکز.

مراحل دقیق سانتریفیوژ برای استخراج پروتئین های سیتوپلاسمی و هسته ای توسط سانتریفیوژ انجماد کم سرعت رومیزی:

1. وضعیت رشد سلولی را تعیین کنید. وضعیت رشد سلولی باید 80 درصد یا بهتر باشد:

2. با سرعت 1500r/min به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید

3. مایع رویی را دور بریزید، سلول ها را با حجم مساوی از PBS سرد بشویید و 3 بار مانند مرحله 2 تکرار کنید.

4. با توجه به میزان بارش تخمین زده شده، 5 برابر حجم سیس بافر ایزوتونیک به ذرات سلولی اضافه کنید تا سلول ها به آرامی معلق شوند و تا حد امکان از ایجاد کف جلوگیری شود.

5. بافر لیز را به سلول های معلق اضافه کنید و آن را به مدت 15 دقیقه روی یخ قرار دهید تا سلول ها منبسط شوند، که با میکروسکوپ قابل بررسی است.

6. برای سلول های منبسط شده در آزمایش سلولی، 10% IGEPALCA-630 را اضافه کنید تا غلظت نهایی به 0.3 برسد، خوب مخلوط کنید و به آرامی اضافه کنید.

7. فوراً سانتریفیوژ کنید (از لوله EP 1.5 میلی لیتری با سرعت 5500r/min برای 30 ثانیه برای مقادیر زیاد استفاده کنید؛ از لوله 50ml با سرعت 5500r/min به مدت 2 دقیقه برای مقادیر زیاد استفاده کنید)

8. مایع رویی (پروتئین سیتوپلاسمی) را به یک لوله انجماد جدید منتقل کنید

9. سلول ها را با حجم 5 برابر ذرات معلق در بافر ایزوتونیک معلق کنید و خوب مخلوط کنید.

10. سوسپانسیون سلولی را با سرعت 1500r/min به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کرده و مایع رویی را خارج کنید.

11. ذرات را با 2/3 برابر حجم بافر استخراج معلق کنید

12. لوله را روی میکسر ارتعاشی قرار دهید، تکان دهید و با سرعت 700r/min به مدت 15 دقیقه و سپس با سرعت 1400r/min به مدت 15 دقیقه هم بزنید. در کل فرآیند باید مراقب باشید تا کف نشود

13. با سرعت 9400r/min به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ کنید، مایع رویی را پس از سانتریفیوژ در دمای پایین به یک لوله سانتریفیوژ منجمد جدید منتقل کنید.

14. به چند قسمت تقسیم کنید و با نیتروژن مایع منجمد کنید و آنها را ذخیره کنید (نگهداری طولانی مدت باید در - 80 ℃، نگهداری کوتاه مدت باید در - 20 ℃ باشد) 3